产品货号:
KFS087
中文名称:
PAGE预制胶(4-20%,15孔)
英文名称:
产品规格:
10块
发货周期:
1~3天
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本制品为聚丙烯酰胺电泳凝胶,用于蛋白分离,采用全自动凝胶灌注技术,产品的重复性好,质量稳定。独特的凝胶缓冲配方使蛋白电泳条带更为清晰锐利,更加均匀,分辨率更高。本制品使用的缓冲液为中性缓冲液,可以提高凝胶稳定性和避免蛋白在电泳过程中的再修饰。请参考如下表格选择合适的预制胶,以便更好地进行蛋白电泳分析。4~20%胶浓度的蛋白分离范围10~270kDa
保质期长、重复性好(预制胶是大规模机械生产,具有良好得重复性)、无需接触有毒试剂、物美价廉节约实验成本。
组分 | 规格 |
PAGE预制胶(4~20%,15孔) | 10块 |
MOPS缓冲液 | 2×1L |
保存:2~8℃,有效期1年。
取出一包MOPS缓冲液(小蛋白使用MES缓冲液效果更好)溶解于1L去离子水中,完全混匀,备用。
- 准备电泳槽和电泳缓冲液,请使用MOPS或者MES电泳缓冲液进行电泳,请勿使用Tris-甘氨酸电泳缓冲液代替,电泳缓冲液反复使用次数建议不超过3次。
- 兼容电泳槽:Bio-Rad Mini-PROTEAN(II/3 Tetra System),Hoefer Mighty Small (SE 250/SE 260/SE 280),Invitrogen Novex Min-Cell。
- 电泳前务必撕去胶板底部胶带,平稳推出梳子,将预制胶装入兼容的电泳槽中,再加入电泳缓冲液:
- 如使用Bio-Rad电泳槽,请确保密封条安装方向:
将电泳槽内框架的绿色硅橡胶密封条取出,然后将其平坦的一面朝外并重新插回内框架的凹槽中。 - 装胶:按照图示中的方法将胶板安装到凝胶电泳装置中。
- 倒入电泳液:在电泳槽的内槽中倒入足够的1×MOPS或MES电泳缓冲液使其覆盖上样孔5~7mm,在外槽中加入相同的电泳缓冲液以确保适当的冷却。为了获得最好的效果,外槽的缓冲液需要加到与内槽持平的位置或稍低,但不可漫过胶板。使用注射器或其他工具吸取适量1×的电泳缓冲液,将上样孔轻轻冲洗干净,去除气泡和残留的储存缓冲液。将蛋白质样品上样、电泳,推荐电压为150V。
注意:相对于MOPS电泳缓冲液来说,MES更适合用于小蛋白的分离;Tris-Glycine电泳缓冲液与百奥莱博预制胶的Bis-Tris缓冲系统不兼容,请不要使用。 - 使用撬具或者合适的工具撬开胶板并小心取出凝胶。
电泳结束后,从电泳槽中将胶板取出,将合适的撬具小心插入胶板之间的空隙中按照图中所示方法慢慢撬动胶板上、中、下三个位置,直至胶板两侧完全分开,胶板打开之后,凝胶可能粘在任意一侧,将无凝胶的胶板取下,将有凝胶的胶板上有胶一侧浸入水中贴着水面,胶板倾斜轻轻提起,凝胶掉入水中后,将凝胶从水中取出进行染色。
条带分辨率低 | 胶浓度错误 | 参照蛋白质迁移表选择合适凝胶 |
上样量过载 | 减少上样量,单孔总蛋白量不超过50μg | |
电泳缓冲液不足,无法降温 | 外槽的电泳缓冲液增加至与上样孔底部大致齐平,以改善散热 | |
样品条带在凝胶中扩散状 | 样品含盐类过多 | 采用透析或者超滤除盐 |
溴酚蓝前沿变黄 | 电泳缓冲液从变形、损坏的胶板渗入选 | 用合适的电泳槽,确认胶板是否破损 |
pH值下降 | 用去离子水重新配置电泳缓冲液 | |
电泳时间过长 | 胶带未撕 | 撕掉胶板下方胶带 |
电泳条件有误 | 使用固定电压和自动电流,如:140V恒压条件进行电泳 | |
电压无法达到设定值 | 电泳时内外槽漏液 | 使用合适的电泳槽,电泳槽胶条未将密封胶条由突起面翻转至平面。详见操作步骤2。 |
样品中其他盐类干扰 | 使用透析或超滤除盐 | |
凝胶与胶板间出现大量气泡 | 电泳缓冲液过热 | 4℃时电泳 |
在外槽添加更多的电泳缓冲液 |
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